在平衡状态下内源性蛋白质产生并降解,因此在稳定的环境条件下其细胞水平是稳定的。粗细胞提取物含有许多能够降解提取物中的蛋白质的内源酶,例如磷酸酶和蛋白酶。当在体外从细胞和组织中提取蛋白质时,蛋白质产生被显著抑制,降解增加。提高完整蛋白质产量的最佳方法是加入已知存在的那些酶的抑制剂。
蛋白酶抑制剂cocktail用于细胞裂解物或组织提取物以提高蛋白质的稳定性。该cocktail起到抑制蛋白酶的作用,这种蛋白酶会降解非磷酸化或磷酸化蛋白质底物。
该蛋白酶抑制剂cocktail包含单个组分,包括对半胱氨酸,丝氨酸,酸性蛋白酶和氨基肽酶具有广泛特异性的AEBSF,Aprotinin,Bestatin,E-64,Leupeptin 和 Pepstatin A。已经用哺乳动物细胞和组织提取物对这种蛋白酶抑制剂cocktail进行了优化和测试。该蛋白酶抑制剂cocktail作为DMSO即用溶液提供。
在室温下解冻,然后在实验前以1:100(v / v)稀释至溶液样品(如细胞裂解物或组织提取物)。
应用:WB,Co-IP,pull-down,IF,IHC,kinase assay等。
Product Name | Summary | Targets | CAS Number | Smiles |
AEBSF.HCl | 丝氨酸蛋白酶抑制剂 | Proteases|Serine Protease | 30827-99-7 | C1=CC(=CC=C1CCN)S(=O)(=O)F.Cl |
Aprotinin | 牛胰蛋白酶抑制剂 | Proteases|Serine Protease | 9087-70-1 | |
Bestatin | 氨肽酶抑制剂 | Proteases|Aminopeptidase | 58970-76-6 | CC(C)CC(C(=O)O)NC(=O)C(C(CC1=CC=CC=C1)N)O |
E-64 | 半胱氨酸蛋白酶(cysteine protease)抑制剂 | Proteases|Cathepsin | 66701-25-5 | CC(C)CC(C(=O)NCCCCN=C(N)N)NC(=O)C1C(O1)C(=O)O |
Leupeptin | 丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶抑制剂 | Proteases|Serine Protease | 103476-89-7 | O=C(C(C([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])C([H])([H])[H])([H])N([H])C(C([H])([H])[H])=O)N([H])C(C(N([H])C(C([H])=O)([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])/N=C(N([H])[H])/N([H])[H])=O)([H])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])C([H])([H])[H] |
Pepstatin A | 天冬氨酸蛋白酶抑制剂 | Proteases|Other Proteases | 26305-03-3 | CC(C)CC(C(CC(=O)O)O)NC(=O)C(C)NC(=O)CC(C(CC(C)C)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)CC(C)C)O |
-20°C条件下储存,稳定12个月以上。 |
1)Q:实验中经常用PMSF来保护蛋白,蛋白酶抑制剂Cocktail和它比有什么优势?
A:PMSF只能抑制一种蛋白酶(丝氨酸蛋白酶),Cocktail抑制的更全面且更加持久;此外,PMSF毒性较高并且PMSF更容易降解失效。
2)Q:抑制剂Cocktail可以反复冻融吗?
A:可以反复冻融,但是尽量减少反复冻融的次数。
3)Q:应该选择片剂的Cocktail还是溶液型Cocktail?
A:两种类型的产品都含有添加物,片剂中含有若干种公司专利的未经公开的医药成分,而溶液型产品中含有溶剂成分DMSO。一般来说这些添加物是不会影响产品效果的。溶液型需要的加工步骤少,因而质量好价格低。而片剂产品在储存和运输两个环节具有优势。(片剂能够在4度储存而不需要零下20度)。
4)Q:用了Cocktail,蛋白仍然降解是怎么回事?
A:蛋白酶抑制剂Cocktail作用是保护蛋白免受蛋白酶降解,提高蛋白得率。对于绝大多数蛋白,Cocktail都有很好的效果。如果还是出现蛋白得率低的情况,可检查实验操作步骤和设计,减少导致蛋白降解的环节。例如,细胞处理前,先要将Cocktail加入到裂解液中并混匀,收集完细胞后立即加入准备好的裂解液。